Curiosità e significato della soluzione Cera Dapi

L'ibridazione genomica comparativa (in sigla dall'inglese: CGH) è un metodo citogenetico molecolare per analizzare le variazioni del numero di copie (CNV) relative al livello di ploidia nel DNA di un campione da testare rispetto a un campione di riferimento, senza la necessità di colture di cellule. Lo scopo di questa tecnica è di confrontare in modo rapido ed efficiente due campioni di DNA genomico derivanti da due fonti, che sono spesso strettamente correlate, che si sospetta che contengano differenze in termini di guadagni o perdite di interi cromosomi o di regioni subcromosomiche (una porzione di un intero cromosoma). Questa tecnica è stata originariamente sviluppata per la valutazione delle differenze tra i complementi cromosomici del tumore solido e del tessuto normale, e ha una risoluzione migliorata di 5-10 megabasi rispetto alle più tradizionali tecniche di analisi citogenetica del bendaggio G (giemsa banding) e dell'ibridazione fluorescente in situ (FISH) che sono limitate dalla risoluzione del microscopio utilizzato.

Ciò si ottiene attraverso l'uso dell'ibridazione in situ a fluorescenza competitiva. In breve, ciò comporta innanzitutto l'isolamento del DNA dalle due sorgenti da confrontare, più comunemente una sorgente di test e una di riferimento, l'etichettatura di ciascun campione di DNA con fluorofori (molecole fluorescenti) di diversi colori (solitamente uno rosso e l'altro verde), la denaturazione del DNA in modo che sia a filamento singolo e l'ibridazione dei due campioni risultanti in un rapporto 1:1 con una normale diffusione in metafase dei cromosomi, a cui i campioni di DNA etichettati si legheranno nel loro locus di origine. Utilizzando un microscopio a fluorescenza e un software, i segnali fluorescenti di differente colore vengono confrontati lungo la lunghezza di ciascun cromosoma per l'identificazione delle differenze cromosomiche tra le due sorgenti. Una maggiore intensità del colore del campione da testare in una specifica regione di un cromosoma indica il guadagno di materiale in quella regione, mentre una maggiore intensità del colore del campione di riferimento indica la perdita di materiale nel campione in quella specifica regione. Un colore neutro (giallo, quando le etichette dei fluorofori sono rosse e verdi) indica che non è presente nessuna differenza tra i due campioni in quella posizione.

Il CGH è in grado di rilevare solo alterazioni cromosomiche sbilanciate. Questo perché anomalie cromosomiche bilanciate come traslocazioni reciproche, inversioni o cromosomi ad anello non influiscono sul numero di copie, che è ciò che viene rilevato dalle tecnologie CGH. La CGH, tuttavia, consente l'esplorazione di tutti i 46 cromosomi umani in un unico test e la scoperta di delezioni e duplicazioni, anche su scala microscopica, che possono portare all'identificazione di geni candidati da esplorare ulteriormente con altre tecniche citologiche.

Attraverso l'uso di microarray di DNA, in combinazione con le tecniche CGH, è stata sviluppata la forma più specifica di array CGH (aCGH), che consente una misura locus per locus delle CNV con una risoluzione aumentata fino a 100 kilobasi. Questa tecnica così migliorata consente di scoprire l'eziologia di condizioni note e sconosciute.

*cera dapi*